在生物制藥領(lǐng)域，動(dòng)物源原料存在安全風(fēng)險(xiǎn)，針對(duì)此風(fēng)險(xiǎn)，各大藥典制定了相關(guān)規(guī)范：

如《歐洲藥典》（EP8.0,2014)第5.2.8章強(qiáng)調(diào)了醫(yī)用產(chǎn)品的生產(chǎn)應(yīng)優(yōu)先考慮使用“非TSE相關(guān)動(dòng)物物種材料”或“無動(dòng)物源材料”，使安全風(fēng)險(xiǎn)低化。

《美國藥典》也明確規(guī)定，為減少TSE傳播的潛在風(fēng)險(xiǎn)，建議使用無動(dòng)物源生產(chǎn)原料代替動(dòng)物源原料。

在疫苗生產(chǎn)領(lǐng)域，無動(dòng)物源培養(yǎng)基的使用不僅可以使安全風(fēng)險(xiǎn)小化，而且存在諸多優(yōu)點(diǎn)。

疫苗生產(chǎn)用『無動(dòng)物源』培養(yǎng)基的優(yōu)點(diǎn)

生產(chǎn)疫苗使用的動(dòng)物源細(xì)胞培養(yǎng)基，具有潛在的安全風(fēng)險(xiǎn)，且存在批間差異，審批手續(xù)繁瑣等問題。

而無動(dòng)物源培養(yǎng)基有著極大地*性：

1.無動(dòng)物源培養(yǎng)基*避免了因原材料導(dǎo)致接種者感染外源病毒的風(fēng)險(xiǎn)

2.防止了動(dòng)物源原料帶來的病毒干擾目標(biāo)病毒

3.無血清的配方，使細(xì)胞懸浮培養(yǎng)更容易，減少細(xì)胞成團(tuán)，利于疫苗廠大規(guī)模懸浮培養(yǎng)

4.無動(dòng)物源配方，批間差異更小，利于工業(yè)化穩(wěn)定生產(chǎn)

5.原料無動(dòng)物源成份，使疫苗審批的申報(bào)流程更簡(jiǎn)便

6.無動(dòng)物源培養(yǎng)基，在海關(guān)進(jìn)口時(shí)，手續(xù)更簡(jiǎn)便，保證原料更快捷地能及時(shí)供應(yīng)

無動(dòng)物源培養(yǎng)基已被疫苗生產(chǎn)廠家大量使用，其中一款Himedia公司研制的新型的CELLin1™培養(yǎng)基，更是因其應(yīng)用面廣，細(xì)胞培養(yǎng)效果佳，病毒產(chǎn)量大，而表現(xiàn)上佳。

CELLin1™培養(yǎng)基適用的疫苗品種范圍

CELLin1™適用于以下疫苗生產(chǎn)常用的5種細(xì)胞

CELLin1™作為一種

新型『無動(dòng)物源』培養(yǎng)基，

專門用于培養(yǎng)上述五種細(xì)胞，

且具有非常好的培養(yǎng)效果。

CELLin1™『病毒生產(chǎn)能力』和『促細(xì)胞生長(zhǎng)能力』

驗(yàn)證報(bào)告

1.實(shí)驗(yàn)信息

本實(shí)驗(yàn)使用CELLin1™無動(dòng)物源培養(yǎng)基與競(jìng)品OptiPRO™SFM (Gibco)無動(dòng)物源培養(yǎng)基分別培養(yǎng)細(xì)胞。

實(shí)驗(yàn)選用的細(xì)胞系：

MDBK細(xì)胞，牛皰疹病毒1型(BHV-1)

MDCK細(xì)胞，流感病毒A

PK-15細(xì)胞，豬圓環(huán)病毒2型（PCV）

Vero細(xì)胞，狂犬病毒

B.實(shí)驗(yàn)觀測(cè)指標(biāo)

1.病毒產(chǎn)生能力（96孔板內(nèi)進(jìn)行）

1.1生長(zhǎng)曲線：檢測(cè)培養(yǎng)基維持細(xì)胞生長(zhǎng)和達(dá)到高細(xì)胞密度和高活力的能力

1.2病毒滴度：檢測(cè)培養(yǎng)基支持病毒在宿主細(xì)胞內(nèi)繁殖的能力

2.種子制備和細(xì)胞存儲(chǔ)

宿主細(xì)胞系的存儲(chǔ)和種子制備是病毒疫苗生產(chǎn)前的2個(gè)主要步驟。通過連續(xù)傳代，檢測(cè)CELLin1™支持宿主細(xì)胞生長(zhǎng)的能力。

C.實(shí)驗(yàn)結(jié)果

MDBK細(xì)胞

采用CELLin1™培養(yǎng)MDBK細(xì)胞，

BHV1病毒滴度用TCID50 (108）表示（下圖）。

數(shù)據(jù)表明，CELLin1™培養(yǎng)的細(xì)胞少反而得到了更大的病毒產(chǎn)量，CELLin1™培養(yǎng)的MDBK細(xì)胞更健康、更有活力，產(chǎn)毒能力更強(qiáng)。

MDBK細(xì)胞在T175培養(yǎng)瓶中，

用CELLin1™或競(jìng)品培養(yǎng)基培養(yǎng)和連續(xù)傳代。

當(dāng)細(xì)胞長(zhǎng)至70-80%時(shí)進(jìn)行傳代（下圖）。

CELLin1™連續(xù)五代培養(yǎng)的MDBK細(xì)胞數(shù)量遠(yuǎn)高于競(jìng)品，而且細(xì)胞生長(zhǎng)更穩(wěn)定。

MDCK細(xì)胞

采用CELLin1™培養(yǎng)MDCK細(xì)胞，

流感病毒A滴度用TCID50 (108）表示（下圖）。

數(shù)據(jù)表明，CELLin1™培養(yǎng)的MDCK細(xì)胞產(chǎn)毒能力更強(qiáng)。

連續(xù)五代培養(yǎng)，CELLin1™培養(yǎng)的MDCK細(xì)胞數(shù)量遠(yuǎn)高于競(jìng)品，對(duì)細(xì)胞的支持非常穩(wěn)定。

PK-15細(xì)胞

采用CELLin1™培養(yǎng)PK-15細(xì)胞，

豬圓環(huán)病毒滴度用TCID50 (108）表示（下圖）。

數(shù)據(jù)表明，CELLin1培養(yǎng)基更適合PK-15細(xì)胞生長(zhǎng)。

PK-15細(xì)胞在T175培養(yǎng)瓶中，

用CELLin1™或競(jìng)品培養(yǎng)基培養(yǎng)和連續(xù)傳代。

當(dāng)細(xì)胞長(zhǎng)至70-80%時(shí)進(jìn)行傳代（下圖）。

連續(xù)五代培養(yǎng)，CELLin1™培養(yǎng)的PK-15細(xì)胞數(shù)量均高于競(jìng)品，對(duì)細(xì)胞的支持非常穩(wěn)定。

Vero細(xì)胞

采用CELLin1™培養(yǎng)Vero細(xì)胞，

狂犬病毒滴度用TCID50（108） 表示（下圖）。

數(shù)據(jù)表明，CELLin1™培養(yǎng)的細(xì)胞少反而得到了更大的病毒產(chǎn)量。CELLin1™培養(yǎng)的Vero細(xì)胞更健康、更有活力，產(chǎn)毒能力更強(qiáng)。

Vero細(xì)胞在T175培養(yǎng)瓶中，

用CELLin1™或競(jìng)品培養(yǎng)基培養(yǎng)和連續(xù)傳代。

當(dāng)細(xì)胞長(zhǎng)至70-80%時(shí)進(jìn)行傳代（下圖）。

通過連續(xù)五代培養(yǎng)，與競(jìng)品的細(xì)胞密度對(duì)比，CELLin1™對(duì)Vero細(xì)胞的支持非常穩(wěn)定。

D. 結(jié)論

CELLin1™支持Vero、PK-15、MDCK、MDBK細(xì)胞生長(zhǎng)和病毒繁殖的能力已得到了驗(yàn)證。

在這些細(xì)胞系中，CELLin1™顯示出的病毒生產(chǎn)能力和促細(xì)胞生長(zhǎng)能力。

因而，CELLin1™可有效的作為通用培養(yǎng)基用于Vero、PK-15、MDCK、MDBK細(xì)胞的病毒生產(chǎn)。

CELLin1™的配制方法

CELLin1™是一款化學(xué)限定的

疫苗生產(chǎn)用『無動(dòng)物源』培養(yǎng)基，

分為A、B兩個(gè)部分。

A部分為基礎(chǔ)培養(yǎng)基，

呈白色至淺粉色均勻粉末，2-8 ℃避光保存。

B部分為生長(zhǎng)添加劑，

呈無色透明溶液，-20 ℃保存.

1L規(guī)格的CELLin1™配制步驟

取11.5g A部分用900ml組織培養(yǎng)級(jí)別水重懸，持續(xù)攪拌直至粉末*溶解。不要加熱。

加入2.70g碳酸氫鈉粉末或36.0ml 7.5％碳酸氫鈉溶液配制1升培養(yǎng)基。攪拌至溶解。

加入584mg的L-谷氨酰胺粉末或加入20mL濃度為200mM的L-谷氨酰胺以制備1升培養(yǎng)基。攪拌至溶解。

用1mol/L的HCl或1mol/L的NaOH將pH調(diào)節(jié)至低于理想pH值0.2-0.3單位水平，因?yàn)閜H值在過濾后趨于上升。

用組織培養(yǎng)級(jí)別水將體積補(bǔ)足至1000ml。

立即用孔徑≤0.22μM濾器過濾培養(yǎng)基以滅菌。使用正壓而非真空抽濾，以減少CO2的丟失。

在2-8℃解凍生長(zhǎng)添加劑（B部分）。

在A部分和B部分放入生物安全柜之前，對(duì)兩部分瓶子表面噴灑異丙醇進(jìn)行消毒。

在無菌條件下將B部分全部?jī)?nèi)容物轉(zhuǎn)移至1L基礎(chǔ)培養(yǎng)基（A部分）中，輕輕混合。

配置*的培養(yǎng)基可直接使用。儲(chǔ)存時(shí)，*培養(yǎng)基在2-8℃下的保質(zhì)期為8周。

     注：在使用過程中，還需要細(xì)胞的無血清馴化。

CELLin1™產(chǎn)品信息

品名：CELLin1™化學(xué)限定疫苗生產(chǎn)用無動(dòng)物源成分培養(yǎng)基

英文名：CELLin1™ Chemically defined, Animal Component Free Virus Production medium

貨號(hào)：SFM036AP

生產(chǎn)商：HiMedia Laboratories

生產(chǎn)地：印度

組成：

A部分為基礎(chǔ)培養(yǎng)基，干粉，2-8℃保存

B部分為生長(zhǎng)添加劑，液體，-20 ℃保存

內(nèi)毒素含量：小于1EU/ml

市場(chǎng)價(jià)：

1L/套    ￥950

10L/套   ￥8000

廠家介紹:

HiMedia   Laboratories公司是世界的培養(yǎng)基生產(chǎn)廠家。HiMedia公司總部位于印度，50年致力于微生物培養(yǎng)基和細(xì)胞培養(yǎng)基的研發(fā)生產(chǎn)，在制藥等工業(yè)生產(chǎn)中被廣泛應(yīng)用，其產(chǎn)品行銷140多個(gè)國家。尤其是HiMedia公司的非動(dòng)物源培養(yǎng)基，在上占地位。

HiMedia公司生產(chǎn)的培養(yǎng)基都具備

WHO GMP、ISO9001、

ISO13485質(zhì)量管理體系認(rèn)證

和CE、FDA注冊(cè)登記，

能更好地應(yīng)用于工業(yè)化生產(chǎn)。

2019年，HiMedia公司的CELLin1™產(chǎn)品正式進(jìn)入中國，由北京締一生物作為總代理。北京締一生物被中國生物界譽(yù)為值得“持續(xù)信賴的供貨商”，在細(xì)胞培養(yǎng)的工業(yè)化生產(chǎn)領(lǐng)域有著專業(yè)的技術(shù)背景，為國內(nèi)疫苗生產(chǎn)（如流感疫苗，禽流感疫苗，豬藍(lán)耳疫苗等）提供了有力的幫助和支持。

現(xiàn)今我們引入CELLin1™給科研人員和工業(yè)藥廠，希望能幫助藥廠進(jìn)一步發(fā)展，使我國疫苗生產(chǎn)領(lǐng)域能邁上一個(gè)全新的高度！