葉酸的檢測方法有許多種，主要根據(jù)測定試樣來決定其測定方法。若測定葉酸藥劑或制品中的葉酸含量，通常可采用高壓液相色譜法、比色法、熒光分析法、紫外分光光度法以及薄層層析法等。若測定食品或植物中的游離葉酸，一般都采用微生物測定法。

　　常用的檢測葉酸的干酪乳桿菌葉酸測定用培養(yǎng)基菌株有鼠李糖乳桿菌ATCC7469、糞鏈球菌以前被稱為ATCC8043、啤酒小球菌ATCC8081。此3種微生物對不同形式葉酸的敏感度不同。糞鏈球菌只對非甲基化葉酸敏感，如葉酸(PteGlu)、二氫葉酸(DHF)和四氫葉酸(THF)，可用于鑒別分析各種形式葉酸在不同檢測物中的分布。啤酒小球菌對甲基化葉酸也不敏感。鼠李糖乳桿菌對單谷氨酸葉酸、含2或3個谷氨酸葉酸及其還原型衍生物均敏感，是3種微生物中反應譜帶寬的一種，也是常用的菌種。

　　各種微生物生長需要有一些微量的專一生長因子，它們可能是維生素或氨基酸等。根據(jù)這種需求性為基礎(chǔ)，設計出各種生長因子的定量法，選擇那些以必需定量的營養(yǎng)物為必需生長因子的菌株，制備好*不含該營養(yǎng)物的定量培養(yǎng)基，再分別在干酪乳桿菌葉酸測定用培養(yǎng)基上加入標準營養(yǎng)物和待測樣品，并定量地接種菌株進行培養(yǎng)。然后根據(jù)微生物生長隨營養(yǎng)物加入量的不同而變化的情況，就可以對樣品中的營養(yǎng)物進行定量。定量的方法有比濁法、酸度滴定法（試管法）、瓊脂平板擴散法和質(zhì)量法等。