微生物污染是造成細胞培養(yǎng)失敗的主要原因 那對于平時的實驗室環(huán)境，我們該如何消毒和滅菌呢？
 

　　(一)物理消毒法
 

　　1、紫外線消毒:紫外線是一種低能量的電磁輻射，可殺死多種微生物。革蘭陰性菌尤為敏感，其次是陽性菌，再次為芽孢，真菌孢子的抵抗力強。紫外線的直接作用是通過破壞微生物的核酸及蛋白質(zhì)等而使其滅活，間接作用是通過紫外線照射產(chǎn)生的臭氧殺死微生物。直接照射培養(yǎng)室消毒，用法簡單，效果好。
 

　　紫外燈的消毒效果同紫外燈的輻射強度和照射劑量呈正相關(guān)，輻射強度隨燈距離增加而降低，照射劑量和照射時間呈正比。因此紫外燈同被照射物的距離和照射時間要適合。離地面2米的30W燈可照射9平方米房間，每天照射2-3小時，期間可間隔30分鐘。燈管離地面2米以外要延長照射時間，2.5米照射效果較差。紫外燈照射工作臺的距離不應超過1.5米，照射時間30分鐘為宜。
 

　　紫外燈不僅對皮膚、眼睛傷害，且對培養(yǎng)細胞與試劑等也產(chǎn)生不良影響，因此，不要開著紫外等操作。
 

　　2、高溫濕熱滅菌:壓力蒸汽滅菌是常用的高溫濕熱滅菌方法。對生物材料有良好的穿透力，能造成蛋白質(zhì)變性凝固而使微生物死亡。布類、物、璃器皿、屬器皿、膠和某些培養(yǎng)液都可以用這方法滅菌。
 

　　不同壓力蒸汽所達到的溫度不同，不同消毒物品所需的有效消毒壓力和時間不同。從壓力蒸汽消毒器中取出消毒好的物品(不包括液體)，應立即放到60-70℃烤箱內(nèi)烘干，再貯存?zhèn)溆茫駝t，潮濕的包裝物品表面容易為微生物污染。煮沸消毒也是常用的濕熱消毒方法，它具有條件簡單、使用方便等特點。
 

　　3、高溫干熱消毒：干熱滅菌主要是將電熱烤箱內(nèi)物品加熱到160℃以上，并保持90-120分鐘，殺死細菌和芽孢，達到滅菌目的。主要用于滅菌玻璃器皿(如體積較大的燒杯、培養(yǎng)瓶)、金屬器皿以及不能與蒸汽接觸的物品(如粉劑、油劑)。
 

　　干熱滅菌后要關(guān)掉開關(guān)并使物品逐漸冷卻后在打開，切忌立即打開，以免溫度驟變而使箱內(nèi)的玻璃器皿破裂。干烤箱內(nèi)物品間要有空隙，物品不要靠近加熱裝置。
 

　　燒灼也是滅菌方法之一，常利用臺面上的酒精燈的火焰對金屬器皿及玻璃器皿口緣進行燒灼消毒。
 

　　4、過濾除菌：是將液體或氣體用微孔薄膜過濾，使大于孔徑的細菌等微生物顆粒阻留，從而達到除菌目的。在體外培養(yǎng)時，過濾除菌大多用于遇熱容易變性而失效的試劑或培養(yǎng)液。目前，大多實驗室采用微孔濾膜濾器除菌。關(guān)鍵步驟是安裝濾膜及無菌過濾過程。
 

　　(二)化學消毒：新潔而滅，其0.1%水溶液可對器械、皮膚、操作表面進行擦拭和浸泡消毒。
 

　　(三)抗生素消毒：抗生素主要用于消毒培養(yǎng)液，是培養(yǎng)過程中預防微生物污染的重要手段，也是微生物污染不嚴重時的“急救”方法。不同抗生素殺滅微生物不同，應根據(jù)需要選擇。
 

　　可用于細胞培養(yǎng)的消毒滅菌方法很多，但每種方法都有一定的適應范圍。如常用的過濾除菌系統(tǒng)、紫外照射、電子殺菌燈、乳酸、甲醛熏蒸等手段消毒實驗室空氣；多用新潔而滅消毒實驗室地面；常用干熱、濕熱消毒劑浸泡、紫外照射等方法消毒培養(yǎng)用器皿；采用高壓蒸汽滅菌或過濾除菌方法消毒培養(yǎng)液。
 

　　一、環(huán)境中的支原體污染的預防和清除
 

　　Mycoplasma OffTM是一款支原體噴霧劑，用于清除工作區(qū)域中的支原體。它起效快(10秒鐘即起效)，安全無毒，對細胞不會產(chǎn)生不良影響，噴灑后，可再用干凈紙張擦拭即可。對于工作臺以及各種細胞操作的器具表面，均可使用。如果是需要避免沾染液體的電子設(shè)備，可使用Mycoplasma OffTM濕巾擦拭。
 

　　細胞孵箱、水浴鍋等有溫水的地方，也容易滋生支原體、細菌等。在循環(huán)水中倒入Water ShieldTM(1：200稀釋)即可有效地預防滋生，效果可持續(xù)1個月左右。
 

Mycoplasma OffTM對許多細菌、病毒也有預防和殺滅作用。
 

　　二、細胞培養(yǎng)中支原體污染的祛除
 

　　通常來說，被污染的細胞應該丟棄，以避免成為污染源。但對于珍貴的細胞，可使用Minerva Biolabs公司的Mynox®或Mynox Gold®。以往別的品牌的支原體清除劑，其實只是抑制劑，它們抑制支原體的DNA合成和蛋白合成，但無法殺除。Mynox®是市面上一款具有殺滅作用的清除劑。它提取自枯草桿菌，可與支原體膜特異性結(jié)合，破壞膜通透性，導致支原體膨脹破裂而死。使用Mynox®一般在2-3個小時即可完成清除任務(wù)。
 

　　Mynox Gold®是Mynox®的升級版，它通過四個療程產(chǎn)生作用。每個療程即細胞傳一代。它除了包括Mynox®，也包含復合抗生素成分。以往別的品牌的支原體清除劑只是針對支原體的抗生素成分，但也容易產(chǎn)生耐藥。Mynox Gold®將Mynox®和抗生素結(jié)合，即結(jié)合了二者的優(yōu)點，又去除了二者的不足，因為有的細胞對Mynox®的治療不太適應，而Mynox Gold®要比Mynox®更加溫和，對細胞的毒性效應極小，因而更適用于脆弱的不太好養(yǎng)的細胞。
 

　　三、細胞培養(yǎng)中支原體污染的預防
 

　　Zell ShieldTM直譯過來是細胞盾pai，它不僅能殺菌，還可抑制支原體的蛋白和DNA合成，因而能避免支原體的污染。使用時按1：100的比例加到培養(yǎng)基中，即可使用。它是復合抗生素成分，支原體耐藥的出現(xiàn)幾率很低。
 

四、細胞培養(yǎng)中支原體污染的監(jiān)測
 

　　可使用MB公司出品的Venor® Gem系列，常用的是一步法試劑盒(Venor® Gem OneStep)，它采用靈敏的PCR方法，能識別常見的至少二十七種支原體。所有試劑均在一管內(nèi)，為穩(wěn)定的凍干粉形式，用緩沖液溶解后可直接使用。細胞上清取2l即可完成支原體的篩查。
 

　　總之，支原體雖然發(fā)生率高，但可放可控。以上僅僅列舉的是實驗室的情況，對于生物制藥企業(yè)，如果是病毒液中發(fā)現(xiàn)支原體的污染，也可以采用Mynox®進行清除。總之，支原體的檢測和預防已成為一項常規(guī)操作，這對保障細胞學實驗的順利進行，是非常重要的。