一、核心應用場景
細胞培養污染防控
科研實驗室：檢測細胞培養物中支原體污染，確保實驗結果可靠性。適用于細胞治療、藥物篩選、基因編輯等研究場景。
生物制藥企業：用于疫苗、抗體、細胞治療產品等生物制品的質量控制，符合藥典要求（如歐洲藥典標準），確保生產放行檢測的合規性。
臨床診斷與病原監測
快速檢測：通過PCR或等溫擴增技術直接檢測臨床樣本（如痰液、血液、宮頸分泌物）中的支原體DNA，輔助感染性疾?。ㄈ绾粑?、生殖系統感染）的早期診斷。
動態監測：在雞群、畜群等養殖場景中，通過腭裂拭子、血清等樣本監測支原體（如雞滑液囊支原體）的感染情況，制定防控計劃。
科研與基礎研究
基因表達分析：提取高純度支原體DNA用于基因組測序、轉錄組分析，研究病毒-宿主互作機制。
抗性品種篩選：結合田間病毒檢測數據，評估不同品種的抗病性，推動抗病育種進程。
二、標準操作方法
樣本預處理
細胞培養物：離心收集上清或菌體沉淀，去除宿主細胞碎片（如0.22μm濾膜過濾），濃縮支原體至500μl以內。
臨床樣本：直接取上清或經離心、洗滌后處理，避免蛋白質、多糖等干擾物殘留。
DNA提取步驟（以磁珠法試劑盒為例）
裂解與消化：加入裂解液（含SDS、蛋白酶K）和NaCl，72℃水浴15分鐘，降解蛋白質并釋放DNA。
磁珠結合：加入磁珠懸浮液，通過漩渦振蕩使DNA結合至磁珠表面，經磁性分離架分離磁珠與雜質。
洗滌與純化：用洗滌液A/B去除殘留蛋白質、鹽分，乙醇干燥后，加入洗脫液70℃孵育7分鐘，離心收集純化DNA。
質量檢測：通過分光光度計測定A260/A280比值（理想值1.8-2.0），瓊脂糖凝膠電泳驗證DNA完整性。
關鍵注意事項
污染防控：全程在生物安全柜操作，使用無菌耗材，避免交叉污染；反應后避免開蓋，防止氣溶膠污染。
溫度控制：裂解、洗脫步驟需嚴格溫控（如72℃、70℃），確保酶活性與DNA穩定性。
試劑兼容性：不同批號試劑不可混用，乙醇需使用無水乙醇，避免影響核酸產量。
三、技術優勢與選擇建議
高靈敏度與特異性：可檢測低至10CFU/mL的支原體DNA，避免假陽性/陰性結果。
快速高效：磁珠法試劑盒可在30分鐘內完成提取，配合qPCR或等溫擴增技術實現1-2小時快速檢測。
合規性保障：選擇通過ISO13485認證的試劑盒（如德國MB公司Venor®GeM），符合藥典與行業標準，確保檢測結果法律認可。
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